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其他荧光探针

DAF-FM DA (一氧化氮荧光探针)

DAF-FM DA (一氧化氮荧光探针)

产品编号: FA3251


品牌:ALPHABIO


CAS号: 254109-22-3


产品包装: 100T


产品价格:¥1200.00


详细介绍

DAF-FM DA(NO 荧光探针)

产品编号                产品名称                                       规格
FA3251           DAF-FM DA(NO 荧光探针)                     100T

产品简介:
DAF-FM DA 即 4-Amino-5-Methylamino-2,7-Difluorofluorescein Diacetate,也称DAF-FM Diacetate,是用于一氧化氮(nitric oxide, NO)定量检测的探针,其检测原理为:DAF-FM DA 可以穿过活细胞膜,进入细胞后可以被胞浆内的酯酶催化形成不能穿过细胞膜的 DAF-FM,DAF-FM 本身仅有很弱的荧光,但在与 NO 反应后会生成荧光素-苯骈三氮唑(benzotriazole),可以产生强烈绿色荧光。荧光显微镜、激光共聚 焦显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计或荧光酶标仪都可以用于该荧光探针的检测。
DAF-FM DA 新一代 NO 检测探针,与以往的一氧化氮荧光检测探针 DAF-2 DA 相比较,主要有以下优势:一是 DAF-FM DA 和 NO 反应形成的荧光产物在 pH5.5 以上不受 pH 影响;二是反应产物荧光更加稳定,不容易淬灭,更加便于检测;三是 DAF-
FM DA 的最低检测浓度可达到 3nM,与 DAF-2 DA 相比最低检测浓度提高近 2 倍。本 DAF-FM DA 为溶解于 DMSO 的淡黄色溶液,浓度为 5mM。通常至少可以检
测 100 个样品。

包装清单:
1 DAF-FM DA(NO 荧光探针) 20μl
2 DAF-FM DA(NO 荧光探针)稀释液 50ml
3 说明书 1 份

保存条件:
-20℃保存,DAF-FM DA 需避光保存,1 年有效。

使用说明:
1.装载探针
对于刺激时间较短(通常为 2 小时以内)的细胞,先装载探针,后用适当的阳性
对照及自己感兴趣的药物刺激细胞。对于细胞刺激时间较长(通常为 6 小时以上)的细胞,先用适当的阳性对照及自己感兴趣的药物刺激细胞,后装载探针。
原位装载探针:本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照 1:1000 比例,用本试剂盒提供的DAF-FM DA 稀释液稀释 DAF-FM DA,使终浓度为 5μM/L。去除细胞培养液,加入适当体积稀释好的 DAF-FM DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜,通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的 DAF-FM DA 的体积为 1mL。37℃细胞培养箱内孵育 20 分钟。用 PBS(pH7.4)洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的 DAF-FM DA。
收集细胞后装载探针:按照 1:1000 比例,用本试剂盒提供的 DAF-FM DA 稀释液稀释DAF-FM DA,使终浓度为 5μM/L。细胞收集后,用稀释好的 DAF-FM DA 重悬细胞, 细胞浓度为 1×106~2×107cell/mL,37℃细胞培养箱内孵育 20 分钟。上述操作可以在离心管内进行。每隔 3-5 分钟颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触。用 PBS(pH7.4)洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的 DAF-FM DA。直接用适当的阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞,或把细胞等分成若干份后再刺激细胞。
2.检测
对于原位装载探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接观察(用普通的荧光显微镜观察效果相对较差),或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。对于收集细胞后装载探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测,用激光共聚焦显微镜直接观察也可以。
3.参数设置
使用 495nm 激发波长,515nm 发射波长,实时、逐时间点或单时间点检测刺激前后荧光的强弱。DAF-FM 和一氧化氮反应产物的荧光光谱和fluorescein 非常相似, 可以用检测fluorescein 的参数设置进行检测,用检测 FITC 的参数设置进行检测也可以。
4.其它说明
上述推荐的 DAF-FM DA 的工作浓度为 5μM/L,对于某些细胞,如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强,可以按照 1:2000-1:5000 的比例稀释 DAF-FM DA, 使装载探针时 DAF-FM DA 的浓度为 1-2.5μM/L。相反,如果发现用感兴趣的药物刺激后荧光较弱,可以把 DAF-FM DA 的工作浓度为调整为 10μM/L,以提高检测的灵敏度。另外,探针装载的时间也可以根据情况在 15-60 分钟内适当进行调整。


注意事项:
1、BSA 和酚红对该荧光探针的检测有干扰,需避免。
2、第一次使用前请将本品分装并于-20℃冻存,避免反复冻存;荧光探针工作液需立刻使用,不能长时间保存。
3、DAF-FM DA 在 4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以 20-25℃温浴片刻至全部融解后使用。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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